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INDU√á√ÉO DE CORPOS LIP√ćDICOS EM MACR√ďFAGOS MURINOS AP√ďS CENTRIFUGA√á√ÉO, DI√ĀLISE E TESTE DE TEMPERATURA DO SORO HOM√ďLOGO.

Thiago Torres de Aguiar, Laura Azeredo Miranda Mota, Renato Augusto Damatta

Resumo


Corpos lip√≠dicos (CL) s√£o organelas induz√≠veis e ricas em lip√≠dios encontradas em praticamente todos os organismos. CL s√£o modulados em c√©lulas do sistema imunol√≥gico. Apesar disto, essa organela √© pouco conhecida. Nosso estudo tem demonstrado que macr√≥fagos de camundongo cultivados com soro hom√≥logo (SH) apresentam dr√°stico aumento no n√ļmero de CL. Com isso objetivamos identificar o(s) componente(s) do SH que induz(em) o aumento da quantidade de CL em macr√≥fagos.

A linhagem de macr√≥fagos J774-A1 foi mantida em garrafas de 25 cm2 em DMEM com 5% de soro fetal bovino. Macr√≥fagos peritoneais foram obtidos de lavado peritoneal de camundongo com Hank¬īs. SH foi ultracentrifugado (100.000 x g), dialisado em membranas de diferentes porosidades (1.000 ou 12.400 Da) e submetido √†s temperaturas de 70, 80, 90 ou 100¬įC por 5 min, separadamente. As c√©lulas foram cultivadas por 24h em DMEM com 2% de SH controle ou tratado ou 2% de suas fra√ß√Ķes. Ap√≥s este per√≠odo, as c√©lulas foram fixadas com formalde√≠do 4% e os CL quantificados ap√≥s marca√ß√£o, para microscopia de fluoresc√™ncia, com o vermelho de Nilo.

Resultados pr√©vios mostram que SH induz aumento da quantidade de CL nas linhagens de macr√≥fagos testadas. Com o intuito de investigar o(s) componente(s) presente(s) no SH que dispara(m) a gera√ß√£o de CL, SH foi separado em tr√™s fra√ß√Ķes ap√≥s ultracentrifuga√ß√£o. Observou-se que todas as fra√ß√Ķes geraram CL de modo similar. Resultados preliminares indicam que SH dialisado em membrana de 1000 Da induz menos CL. Tamb√©m se observou que a capacidade de indu√ß√£o da gera√ß√£o de CL decresce a medida que o SH foi submetido a altas temperaturas. Nosso objetivo agora √© restringir o grupo de poss√≠veis componentes indutores presentes no SH e desta forma tentar desvendar o(s) componente(s) que induz(em) CL.

Constatamos que o(s) componente(s) do SH indutor(es) de CL não pode(m) ser separado(s) por ultracentrifugação. Observou-se também que esse(s) componente(s) foi(ram) sensíveis a temperatura. A diálise é, aparentemente, um técnica promissora para o estudo desse(s) componente(s).

Palavras-chave


Corpos lipídicos; Macrófagos; Soro homólogo

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