INDUÇÃO DE CORPOS LIPÍDICOS EM MACRÓFAGOS MURINOS APÓS CENTRIFUGAÇÃO, DIÁLISE E TESTE DE TEMPERATURA DO SORO HOMÓLOGO.

Thiago Torres de Aguiar, Laura Azeredo Miranda Mota, Renato Augusto Damatta

Resumo


Corpos lipídicos (CL) são organelas induzíveis e ricas em lipídios encontradas em praticamente todos os organismos. CL são modulados em células do sistema imunológico. Apesar disto, essa organela é pouco conhecida. Nosso estudo tem demonstrado que macrófagos de camundongo cultivados com soro homólogo (SH) apresentam drástico aumento no número de CL. Com isso objetivamos identificar o(s) componente(s) do SH que induz(em) o aumento da quantidade de CL em macrófagos.

A linhagem de macrófagos J774-A1 foi mantida em garrafas de 25 cm2 em DMEM com 5% de soro fetal bovino. Macrófagos peritoneais foram obtidos de lavado peritoneal de camundongo com Hank´s. SH foi ultracentrifugado (100.000 x g), dialisado em membranas de diferentes porosidades (1.000 ou 12.400 Da) e submetido às temperaturas de 70, 80, 90 ou 100°C por 5 min, separadamente. As células foram cultivadas por 24h em DMEM com 2% de SH controle ou tratado ou 2% de suas frações. Após este período, as células foram fixadas com formaldeído 4% e os CL quantificados após marcação, para microscopia de fluorescência, com o vermelho de Nilo.

Resultados prévios mostram que SH induz aumento da quantidade de CL nas linhagens de macrófagos testadas. Com o intuito de investigar o(s) componente(s) presente(s) no SH que dispara(m) a geração de CL, SH foi separado em três frações após ultracentrifugação. Observou-se que todas as frações geraram CL de modo similar. Resultados preliminares indicam que SH dialisado em membrana de 1000 Da induz menos CL. Também se observou que a capacidade de indução da geração de CL decresce a medida que o SH foi submetido a altas temperaturas. Nosso objetivo agora é restringir o grupo de possíveis componentes indutores presentes no SH e desta forma tentar desvendar o(s) componente(s) que induz(em) CL.

Constatamos que o(s) componente(s) do SH indutor(es) de CL não pode(m) ser separado(s) por ultracentrifugação. Observou-se também que esse(s) componente(s) foi(ram) sensíveis a temperatura. A diálise é, aparentemente, um técnica promissora para o estudo desse(s) componente(s).


Palavras-chave


Corpos lipídicos; Macrófagos; Soro homólogo