PADRONIZAÇÃO DE MÉTODOS COMPLEMENTARES DE IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE BACTÉRIAS EM LARGA ESCALA

Autores

  • Tamiris Fontes Rodrigues
  • Gonçalo Apolinário De Souza Filho

Palavras-chave:

Protocolos de extração, DNA bacteriano, PCR

Resumo

A biologia molecular tem sido amplamente utilizada em pesquisas laboratoriais com microorganismos, com ênfase à detecção e identificação de bactérias. Uma etapa crucial para tais trabalhos consiste na obtenção de DNA genômico bacteriano em concentração, qualidade e pureza adequadas aos procedimentos subseqüentes de reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento. O presente trabalho tem como objetivo a implementação de um protocolo de identificação molecular de bactérias, em larga escala.Neste sentido, foram avaliadas e comparadas diferentes abordagens que visam estabelecer um método de extração de DNA genômico de bactéria de baixo custo, compatível com placas de 96 poços e executável com micropipetadores multi-canais. Entre as estratégias testadas incluiu-se a utilização DNAzol, lise por SDS e diferentes métodos de precipitação. Os resultados dos procedimentos de extração foram analisados por eletroforese em gel de agarose 1%, a fim de avaliar a rendimento e qualidade do DNA extraído.Para conferir a possibilidade de uso posterior em técnicas moleculares, os DNAs extraídos, e suas diluições, foram utilizados para a amplificação da sequência MEint, via PCR. Os resultados permitiram definir dois protocolos que forneceram DNA adequado para a realização da PCR. Em ambos os casos, o DNA extraído forneceu melhor resultado quando diluído, pois desta forma diminuí-se a concentração de possíveis contaminantes e interferentes na reação.Sendo assim, concluímos, por meio dos protocolos testados até o presente momento, que é possível a implementação de um método de extração de DNA genômico de baixo custo e adequado para sua utilização em procedimentos posteriores.

Publicado

04-04-2012