DESENVOLVIMENTO DE NOVOS MICROSSATÉLITES LOCALIZADOS NA REGIÃO XP21.2-XP21.1 PARA O DIAGNÓSTICO INDIRETO DE DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE

Resumo

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é a doença genética com padrão de herança recessiva ligada ao sexo mais freqüente, causada por mutações no gene DMD. O diagnóstico indireto de portadores pode ser feito mediante análise de ligação de marcadores do tipo Repetições Curtas em Tandem (STR). Atualmente são usados STR dinucleotídeos, que compromete a designação dos alelos. O objetivo foi desenvolver marcadores STR tetra- e pentanucleotídeos para o diagnóstico indireto de portadores da DMD.Foi realizada a mineração in silico de novos STR tetranucleotídeos e pentanucleotídeos na região Xp21.2-p21.1 utilizando ferramentas de bioinformática. O índice potencial de polimorfismo foi determinado in silico pela validação comparativa de banco de dados de 3 genomas de referência. Marcadores selecionados foram utilizados no desenvolvimento de um ensaio multiplex da Reação em cadeia da Polimerase Quantitativa de Fluorescência (QF-PCR).Foram desenvolvidos 13 marcadores inéditos, intrônicos em DMD, compreendidos em uma região de 1,95 Mb (distância genética 8,8 cM). A designação alélica dos novos marcadores por tipagem de DNA de indivíduos não afetados foi realizada de maneira acurada, mostrando maior precisão em diagnóstico indireto. O ensaio multiplex foi testado em cinco famílias com acometidos pela DMD, e a análise permitiu a identificação indireta dos cromossomos dos indivíduos portadores de mutação causadoras da DMD nestas famílias.Através da análise de ligação, utilizando os novos marcadores, foi possível identificar portadoras da mutação pela identificação dos alelos do indivíduo acometido. Os 13 marcadores foram validados e mostraram ser altamente informativos para utilização em diagnóstico indireto.